کلون کردن اپیتوپ‌های خطی آنتی ژن P14-3-3 در وکتور pEGFP-N1 به عنوان یک مدل واکسن DNAجهت القا ایمنی علیه کیست هیداتیک و بررسی بیان آن در رده سلولی CHO

Authors

  • احمدزاده, مژگان گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
  • انگجی, سید عبدالحمید گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
  • طهماسب, محمد گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
  • محمدی, سمیه گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
  • مصری, رقیه گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
Abstract:

زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می­شود. در مرحله لاروی این انگل آنتی­ژن­های متعددی تولید می­شود که یکی از این آنتی­ژن­ها، آنتی­ژنی از خانواده پروتئین­های p14-3-3 می­باشد و واکسن نوترکیب آن ایمنی‌زایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژن­تر بودن نواحی اپی­توپی آنتی­ژن­ها و تولید پاسخ ایمنی  Th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن اپی­توپ­های خطی این آنتی­ژن شناسایی شده در وکتور N1–pEGFP بود که در ساخت یک مدل  DNA واکسن مؤثر بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از شناسایی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن p14-3-3 توسط نرم­افزارهای بیوانفورماتیکی، توالی             کد­کننده آن به صورت سنتتیک فراهم شد، پس از تکثیر با واکنش PCR  و هضم توسط آنزیم محدود کننده  ‌XhoI، در وکتور            N1 – pEGFP تخلیص شده با روش سمبروک تغییر یافته که همراه  با استفاده از CaCl2 وPEG6000  می­باشد کلون شده و کلونی­های مثبت حاوی وکتور نوترکیب ابتدا به روش colony PCR و سپس توالی‌یابی تأیید شد. برای بررسی بیان در سلول­های یوکاریوت با روش الکتروپوریشن به رده سلولیCHO  منتقل شدند. یافته­ها: توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس پس از شناسایی، سنتز و تکثیر در وکتورpEGFP-N1 که تخلیص آن  با روش جدید به خوبی با حداکثر غلظت پلاسمید و حداقل مقدار RNA همراه است، کلون شده و پس از تأیید کلونینگ، بیان آن نیز در رده سلولی CHO به عنوان نمونه­ای از سلول­های یوکاریوت به صورت موفقیت­آمیز با میکروسکوپ فلورسنت انجام شد و استفاده از سازه حاصل در قالب واکسن ژنی برای  بررسی پاسخ ایمنی در مدل­­های موشی در مراحل بعدی پژوهش انجام خواهد شد. نتیجه­گیری: نتایج حاصل از توالی یابی، تأیید کننده کلونینگ صحیح توالی کد کننده اپی­توپ­­­­­های خطی آنتی­ژن &zeta P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP-N1  بوده و نتایج حاصل از میکروسکوپ فلورسانس نشانگر بیان موفقیت­آمیز پروتئین نوترکیب در سلول یوکاریوتیCHO می­باشد. واژه‌های کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، DNA واکسن،P14-3-3 خش وارد کنید

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

کلون کردن اپیتوپ های خطی آنتی ژن p۱۴-۳-۳ در وکتور pegfp-n۱ به عنوان یک مدل واکسن dnaجهت القا ایمنی علیه کیست هیداتیک و بررسی بیان آن در رده سلولی cho

زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می­شود. در مرحله لاروی این انگل آنتی­ژن­های متعددی تولید می­شود که یکی از این آنتی­ژن­ها، آنتی­ژنی از خانواده پروتئین­های p14-3-3 می­باشد و واکسن نوترکیب آن ایمنی زایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژن­تر بودن نواحی اپی­توپی آنتی­ژن­ها و تولید پاسخ ایمنی  th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن ...

full text

شناسایی وکلون کردن اپی توپ های خطی آنتی ژن p14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pegfp-n1 و بررسی بیان آن در سلول های cho

در این پروژه به منظور طراحی و ساخت یک dna واکسن موثر علیه کیست هیداتیک با حداقل ساختار ممکن و حداکثر قدرت تحریک ایمنی از توالی کدکننده اپی توپ های خطی آنتی ژن p14-3-3 که ایمونوژن تر می باشد و در اکثر مراحل زندگی انگل و سروتیپ های متعدد با ساختار حفاظت شده وجود داشته و واکسن نوترکیب آن نیز پاسخ ایمنی چشمگیری را علیه کیست هیداتیک نشان داده، جهت کلونینگ در وکتور بیانی pegfp-n1 به جای توالی کدکننده...

کلون کردن اپیتوپ های خطی آنتی ژن eg95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pegfp وبررسی بیان آن در سلول cho

زمینه و هدف: کیست هیداتیک، بیماریی است که ازطریق تخم انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس دفع شده از مدفوع سگ آلوده به انسان و دام منتقل می شود. این انگل، یکی از کرم های نواری خانواده ی taeniidae می باشد که باعث ایجاد مشکلات بهداشتی گسترده در انسان و خسارت های اقتصادی به صنعت دامپروری می شود. بدین منظور، طراحی واکسن به منظور پیشگیری ازبروز این بیماری حائز اهمیت می باشد. مواد و روش ها: در این تحقیق، توال...

full text

کلون‌کردن اپیتوپ‌های خطی آنتی‌ژن Eg95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP وبررسی بیان آن در سلول CHO

زمینه و هدف: کیست هیداتیک، بیماریی است که ازطریق تخم انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس دفع‌شده از مدفوع سگ آلوده به انسان و دام منتقل‌می‌شود. این انگل، یکی از کرم‌های نواری خانواده‌ی Taeniidae می‌باشد که باعث ایجاد مشکلات بهداشتی گسترده در انسان و خسارت‌های اقتصادی به صنعت دامپروری می‌شود. بدین منظور، طراحی واکسن به‌منظور پیشگیری ازبروز این بیماری حائز اهمیت می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این تحقیق، توال...

full text

کلون سازی و بیان ژن هیرودین نوترکیب در رده سلولی CHO

هیرودین پروتئینی به طول 66-65 اسیدآمینه می باشد که از غدد بزاقی زالو ترشح و به عنوان یک داروی ضدانعقاد مطرح است. این دارو مهارکننده بسیار قوی ترومبین بوده و در ممانعت از ترومبوسهای عروقی موثر است. هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن هیرودین در سلول های  CHO به عنوان یک سلول یوکاریوتی بود. در مطالعه حاضر، قطعه 221 بازی ژن هیرودین در وکتور pcDNA3.1(+) کلون گردید. وکتور نوترکیب هیرودین در سلول CHO با ا...

full text

کلون کردن اپی توپ های خطی پیش بینی شده آنتی ژن تروپومیوزین اکینوکوکوس گرانولوزوس برای لنفوسیت های t در وکتور pegfp-n1 و بررسی بیان آن در رده ی سلولی cho

اکینوکوکوس گرانولوزوس انگلی است که آلودگی با مرحله لاروی آن سبب ایجاد بیماری هیداتیدوزیس در انسان و نشخوارکنندگان می شود؛ تاکنون نزدیک به ده ژنوتیپ از این انگل شناسایی شده است. کشور ایران جزء مناطق با شیوع بالا است، بر این اساس مقابله با این انگل از لحاظ بهداشت جامعه اهمیت خاصی دارد. آنتی ژن های متفاوتی در مراحل مختلف زندگی این انگل بیان می شود، که یکی از آنها تروپومیوزین است. مطالعات پیشین نشا...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 20  issue 8

pages  666- 676

publication date 2015-11

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023